科学家开发出了一种方法净化大量的肽以并行的方式。它使用一个可分裂的链接器系统和释放不受保护的肽。团队希望开发概念变成常规工具,可以跟上日益高输出的并行多肽合成。
最新发展并行固相肽合成可以产生数百每个合成肽。传统方法去除副产物产生的肽样本中依赖于高效液相色谱法(HPLC)。然而,高效液相色谱法的效率降低肽长度增加和更多的反应不完全匹配,导致更多的杂质分离和相关的挑战。高效液相色谱是一个线性的过程,即使是最先进的净化安装起来超过15分钟肽。用它的肽和你遇到严重的瓶颈。
我们的方法是关注预防副反应通过创建一个意向性还原性劈得开的链接器提高纯度,”解释道罗伯特Zitterbart从公司peptide-therapeutics Belyntic在德国。Zitterbart和他的同事们发现,添加一个溴化帕拉叠氮基苄一部分链接器在多肽合成肽作为最后一步举行无踪迹的净化的关键。
链接器固定目标肽在固体支持以便所有non-tagged杂质如副产品或其他碎片缺少链接器可以被清洗。接下来,链接器准备劈理,减少其叠氮化芳基苯胺,还原剂是用水洗。在最后一步中,酸催化1 - 6-elimination优惠链接器在温和的条件下。这是一个使用基本条件分离链接器的优势,因为他们可以破坏肽的完整性。
这一挑战的最有益的方面是微调的电子属性链接器分子给释放机制,“Zitterbart解释道。我们最终选择了卤化,与溴帕拉-azido-benzyl核心,因为它是相对容易的引入和高电子撤回效应”。
作为一个概念验证,该团队使用他们的技术净化20 neoantigen肽组成的个性化的癌症治疗。14肽实现最后一个纯洁的90%在六个小时时间内,指着技术制造业加速治疗的潜力。”之间的区别就像洗碗机,洗很多的物品,和洗脏餐具的每一项,并且多次换水,“Zitterbart说。
这升级链接器是一种改善前肽容易清洁技术——遭受base-mediated副反应在某些序列,因为它可以通过减少温和激活一个芳基叠氮化。使用经典物理有机连接程序中参数设计和优化,增加稳定三氟乙酸乳沟,避免溴化的副产品——优雅而满足,”评论詹Stockdill美国韦恩州立大学,研究探讨如何提高肽的合成可访问性和protein-derived疗法。
但也不是没有缺点的方法。有时杂质中形成完整的肽链在固相多肽合成并不总是删除。然而,团队说他们的方法可以作为一般净化步骤的总体比例显著降低杂质,此时高效液相色谱纯化变得可行。Zitterbart说它开门疏水肽等净化更具挑战性的肽,否则坚持相列,或肽与多个截断。它还使用显著降低大量的高纯度级有机溶剂比典型的高效液相色谱过程,这可能帮助推动肽制造业转向一个更可持续的未来。”
Stockdill说测试技术在个性化肽疫苗库是一个令人兴奋的应用程序,让人大跌眼镜。三个竖起大拇指!我等不及我的学生使用此方法来净化我们的肽。他们会很兴奋不起床4点的高效液相色谱法。
八款这个故事于2021年2月17日更新澄清技术的缺点
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